PCR: 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction), DNA를 이용하여 in vitro 95°C에서 풀기(denature), 55°C에서 염기 상보성 쌍의 원리에 따라 프라이머와 단일 가닥을 결합(annealing)한 후 온도 조절 약 72°C까지, DNA 중합효소는 인산에서 5개의 탄소당(5'-3') 방향을 따라 상보적 가닥을 합성(확장)합니다.
PCR 장비는 실제로 95°C, 55°C 및 72°C 사이에서 온도 조절을 잘 수행할 수 있는 온도 조절 장치입니다.
DNA 증폭 및 검출 표준의 목적에 따라 PCR 기기는 일반 PCR 기기, 그래디언트 PCR 기기, in-situ PCR, 실시간 형광 정량 PCR 기기 등으로 나눌 수 있습니다.
①일반 PCR 기계
일반적으로 PCR 증폭을 위한 특정 어닐링 온도만 실행할 수 있는 PCR 기계를 일반 PCR 기계라고 하며 이는 기존의 PCR 기계이기도 합니다. 다른 어닐링 온도에 사용하려면 여러 번 실행해야 합니다.
일반 PCR 기계는 주로 과학 연구, 교육, 임상 의학, 검사, 검역 등에 사용됩니다.
②Gradient PCR 장비
일회성 PCR 증폭은 구배 PCR 기기라고 하는 일련의 다른 어닐링 온도 조건(일반적으로 12개의 온도 구배)을 설정할 수 있습니다. DNA 조각마다 최적의 annealing 온도가 다르기 때문에 증폭을 위한 일련의 gradient annealing 온도를 설정함으로써 one-time PCR 증폭으로 가장 적합한 annealing 온도를 선별하고 발현 수준이 높아 효과적인 증폭이 가능합니다.
Gradient PCR 장비는 주로 미지의 DNA annealing 온도의 증폭을 연구하는 데 사용되어 시간과 비용을 절약합니다. Gradient를 설정하지 않고 일반 PCR로도 사용할 수 있습니다. Gradient PCR 장비는 주로 과학 연구, 교육 기관, 검사, 검역 등에 사용됩니다.
③In-situ PCR 기계
PCR은 유전자 증폭 반응을 위해 세포나 조직에서 DNA를 추출하는 것이고 in situ PCR은 세포나 조직의 온전함을 유지하고 PCR 반응 시스템을 조직과 세포에 침투시켜 세포의 표적 DNA의 위치에서 유전자를 수행하는 것입니다. 증폭. 표적 DNA뿐만 아니라 표적 DNA가 존재하는 세포의 유형도 검출할 수 있어 표적 DNA와 세포의 관계를 탐색하는 데 더 도움이 된다.
in-situ PCR 장비는 주로 (1) HIV, HPV, HBV, CMV 등과 같은 바이러스 감염 검사에 중점을 둔 외인성 유전자 단편 검출, 검출률 증가, (2) 관찰 체내 병원균의 분포 법칙 (3) 인간 단일 유전자 질환, 재조합 유전자, 전위된 염색체, Ig mRNA 단편, 종양 유전자 단편 등과 같은 내인성 유전자 단편. (4) 도입된 유전자의 검출 (5) β-지중해빈혈과 같은 유전 질환의 검출.
④실시간 형광 정량 PCR 기기
형광 신호 수집 시스템과 컴퓨터 분석 및 처리 시스템은 형광 정량 기능을 가진 PCR 기기를 형성하기 위해 일반적인 PCR 기기 설계를 기반으로 추가되었습니다. PCR 증폭의 원리는 일반 PCR 증폭과 동일하며 PCR 증폭 시 첨가되는 프라이머는 동위원소, 플루오레세인 등으로 표지되며 프라이머와 형광 프로브를 이용하여 동시에 template에 특이적으로 결합합니다. 확대. 증폭된 결과는 형광 신호 획득 시스템의 실시간 획득 신호를 통해 컴퓨터 분석 및 처리 시스템에 연결되고 정량화된 실시간 결과 출력이 얻어진다.
형광 정량 PCR 기계는 단일 채널, 이중 채널 및 다중 채널로 구분됩니다. 하나의 형광 프로브만 라벨링에 사용하는 경우 단일 채널을 사용하고, 여러 형광 라벨이 있는 경우 여러 채널을 사용합니다. 단일 채널은 또한 한 번에 하나의 표적 유전자 증폭량만 검출할 수 있고 상이한 표적 유전자 단편의 양을 검출하기 위해 다중 증폭이 필요하기 때문에 다중 형광 마커 및 표적 유전자 발현 생성물을 검출할 수 있다. 다중 채널은 다중 PCR에 도움이 되며 한 번에 여러 표적 유전자를 검출하는 기능을 실현합니다.
형광 정량 PCR 기기는 주로 임상 의료 테스트, 생물 의학 연구 및 개발, 식품 산업, 과학 연구 기관 등에 사용됩니다. 형광 정량 검출 기술은 간염, 성병, 산전 및 산후 관리와 관련된 질병, 결핵 등 다양한 병원체에 의해 유발되는 질병의 임상 진단에 주로 중점을 두고 임상 진단의 많은 측면을 가지고 있습니다.
