I. 세포 배양 플라스크란 무엇인가?
세포 배양 플라스크는 세포 배양에 사용되는 일반적인 실험실 기구입니다. 고품질 폴리스티렌(PS) 소재로 제작되며, 초정밀 금형과 완전 자동화 생산 공정을 통해 제조됩니다. 실험실 세포 배양에 사용되는 이 제품은 우수한 광학적 특성으로 현미경 관찰에 용이하며, 표면은 세포 부착을 향상시키기 위해 TC 처리되어 있습니다.
II. 세포 현탁액 접종
1. 세포 현탁액 혼합: 필요한 실험 농도에 따라 세포 현탁액을 준비하고 배양 플라스크, 배양 용기 또는 기타 용기에 넣고 충분히 혼합합니다.
2. 피펫 또는 파스퇴르 피펫을 사용하여 세포 현탁액을 세포 배양 플라스크에 천천히 그리고 안정적으로 주입합니다. 이때, 튀거나 거품이 생기지 않도록 주의하십시오. (다층 세포 배양 플라스크의 경우, 액체의 균일한 분포에 특히 주의해야 합니다. 플라스크를 기울이거나 회전시키면 각 층에 액체가 고르게 흐르도록 도울 수 있습니다.)
3. 배양 플라스크를 안정적인 작업대 위에 조심스럽게 놓습니다. 이때 매끄럽고 평평한 면이 위를 향하고, 경사면이 아래를 향하도록 합니다(운반이 용이하도록 쌓을 수 있는 디자인).
4. 세포 배양 플라스크를 적절한 배양기에 넣고 온도(예: 37℃), 습도 및 가스 농도(예: 5% CO₂)를 적절하게 설정합니다.
5. 배양 플라스크에서 세포를 일정 시간 동안 배양합니다.
III. 배양액 교체
1. 기존 배양액 제거: 배양액을 제거할 때는 플라스크를 45도 각도로 기울이고 매끄러운 면이 자신을 향하도록 합니다. 파스퇴르 피펫이나 피펫을 사용하여 기존 배양액을 조심스럽게 제거합니다. 이때 부착된 세포가 떨어지지 않도록 주의해야 합니다. 배양액에 부유 세포나 불순물이 많을 경우, PBS 완충액으로 세포를 한두 번 세척하여 불순물을 제거합니다.
2. 새 배양액 첨가: 기존 배양액을 제거한 후, 배양 플라스크에 적당량의 배양액을 첨가합니다. 부착된 세포에 직접적인 영향을 주지 않도록 배양 플라스크 측면에서 배양액을 첨가합니다. 새 배양액의 양은 세포 밀도와 성장 속도를 고려하여 정상적인 세포 성장을 보장하도록 조절합니다.
IV. 세포 수집
1. 기존 배양액 제거: 세포 배양 플라스크에서 기존 배양액을 조심스럽게 흡입하고, 적당량의 PBS 완충액을 첨가한 후, 플라스크를 부드럽게 흔들어 남아있는 배양액을 씻어내어 세포 표면이 깨끗해지도록 합니다.
2. 세포 소화 및 종료: 적당량의 트립신(≥3ml)을 첨가하여 2~3분간 소화시킨 후, 혈청이 함유된 배양액으로 소화 반응을 종료합니다.
3. 세포 수집: 피펫을 이용하여 세포 현탁액을 원심분리 튜브로 옮긴 후(거품 발생 방지), 적절한 속도(예: 800rpm)로 5분간 원심분리하여 세포가 튜브 바닥에 침전되도록 합니다.
4. 세포 침전물 수집: 원심분리 후, 원심분리 튜브에서 상층액을 조심스럽게 제거합니다(세포 침전물은 버리지 마십시오). 원심분리 튜브에서 세포 침전물을 수집하고 실험에 필요한 추가 처리를 진행합니다.