세포 배양의 일반적인 시약
동물 세포나 조직이 체외에서 배양되기 위해 체외로 나갈 때, 체외에서 성장에 필요한 다양한 영양분과 더 나은 세포 성장을 위해 필요한 다양한 시약을 제공해야 합니다. 이번 호에서는 세포 배양 과정에서 사용되는 일부 시약 성분과 그 기능에 대해 간략하게 소개하겠습니다.
1. 세포 배양 배지 조성
(1).기초 배양 배지
일반적인 기본 배지는 주로 포도당, 아미노산, 물, 미량 원소 및 중탄산나트륨을 포함한 완충 시스템을 주로 제공하는 MEM, DMEM 및 RPMI를 포함합니다.
● 글루타민
세포 성장에 필요한 필수 아미노산으로 단백질 합성과 핵산 대사에 관여한다.
● 페놀 적색 지시약
일반적으로 사용되는 산-염기 지시약으로 산성일 때 노란색, 중성일 때 빨간색, 알칼리성일 때 보라색을 나타냅니다. Phenol red는 배지의 pH 값을 나타내는 지표로 사용됩니다.
● 탄산염/PH 버퍼 시스템
생리학적 pH 완충 시스템. 세포 대사 중 산 생성으로 인해 배지의 HCO3-가 점차 소모되므로 일정 범위 내에서 pH를 유지하려면 CO2를 적시에 보충해야 합니다.
(2).동물 혈청
기본 배지에 2%-20% 혈청을 추가하여 완전한 배지를 형성합니다. 혈청은 성장에 필요한 기본 영양소를 세포에 제공할 수 있을 뿐만 아니라 성장 인자, 호르몬, 미량 원소 및 이온과 같은 세포 대사에 관여하는 중요한 구성 요소를 포함합니다.
(삼). 항생제
배양 과정에서 세포가 오염되는 것을 방지하기 위해 일반적으로 페니실린-스트렙토마이신 혼합물을 완전 배지, 즉 이중 항체에 첨가합니다. 페니실린은 주로 그람 양성 박테리아에 효과적이며 스트렙토마이신은 많은 그람 음성 박테리아에 효과적입니다. .
2. 트립신-EDTA
트립신은 세포 사이의 단백질을 가수분해한 다음 세포를 분리할 수 있습니다. EDTA는 독성이 낮은 화학 킬레이트제이며 부착 세포에 대해 개별적인 영향을 미칩니다. 두 가지를 함께 사용하면 세포 분산 효율이 높아집니다. 이 단계를 소화 세포라고 합니다. 다른 세포의 경우 온도, 시간 및 사용 시 트립신의 농도에 대한 요구 사항이 다릅니다. 소화가 불충분하면 세포가 소화되지 않고 과도한 소화는 세포 손상을 일으킵니다. 배지의 혈청은 트립신의 활성을 감소시킬 수 있으므로 완전 배지는 일반적으로 세포 분해를 종료하는 데 사용됩니다.
3. PBS 버퍼
PBS는 염 균형과 조정 가능한 pH 완충 효과가 있는 인산염 완충 식염수입니다. 일반적으로 세포를 세척하고 세포 삼투압을 유지하는 데 사용됩니다.
4. 디메틸 설폭사이드(DMSO)
중요한 관통 세포 보호제이며 세포 동결 보존액의 중요한 구성 요소입니다. 세포의 동결보존 과정에서 DMSO는 빠르게 세포막을 뚫고 세포 안으로 들어가 어는점을 낮추고, 동결과정을 지연시키며, 세포 내 이온 농도를 증가시키고, 세포 내 얼음 결정의 형성을 감소시키며, 세포를 감소시킨다. 손상.
5. 마이코플라스마 억제제
Mycoplasma 오염은 세포 배양 공정에서 일반적인 오염원입니다. 그러나 마이코플라스마 억제제를 사용하여 오염 초기 단계에서 세포액의 마이코플라즈마를 제거하여 실험을 계속할 수 있습니다.
6. 트리판 블루 염료
세포막 무결성을 감지하는 데 일반적으로 사용되는 생물학적 염색 시약입니다. 세포막 무결성의 손실과 증가된 투과성으로 인해 죽은 세포는 트리판 블루에 의해 파란색으로 염색될 수 있는 반면 살아있는 세포는 트리판 블루가 세포에 들어가는 것을 배제할 수 있는 온전한 세포막을 가지고 있기 때문에 염색되지 않습니다. 살아 있는 세포와 죽은 세포는 현미경으로 세포 색상으로 구분할 수 있어 살아있는 세포 계수에 편리합니다.
